کیا پی سی آر ڈی این اے کی منظوری اور متحرک جین کے ساتھ کیا کرنا ہے
پولیمیریس چین ردعمل ( پی سی آر ) ایک جینی کی ایک سے زیادہ کاپی بنانے کے لئے ایک آناخت جینیاتی تکنیک ہے اور جینی ترتیب عمل کا بھی حصہ ہے.
پولیمیرسی چین کا ردعمل کیسے کام کرتا ہے؟
جینی کاپیاں ڈی این اے کے نمونے کا استعمال کرتے ہوئے بنائے جاتے ہیں، اور ٹیکنالوجی نمونہ میں جین کے ایک ہی کاپی سے ایک سے زیادہ کاپی بنانے کے لئے کافی اچھا ہے. لاکھوں کاپیاں بنانے کے لئے جین کے پی سی آر پرسمیشن، ڈی این اے کے ٹکڑے کے سائز اور چارج (+ یا -) کی بنیاد پر بصری تکنیکوں کا استعمال کرتے ہوئے جینی ترتیبات کا پتہ لگانے اور شناخت کی اجازت دیتا ہے.
کنٹرول شرائط کے تحت، ڈی این اے کے چھوٹے طبقات این این اے کے ڈی این اے پولیمیرس کے نام سے تیار ہوتے ہیں، جو ڈی این اے کا ایک ٹکڑا ہے جس میں "ٹیمپلیٹ" کے نام سے جانا جاتا معتبر ڈیو آکسینکوکلیوڈس شامل ہیں. یہاں تک کہ "پرائمر" کہا جاتا ہے، ڈی این اے کے چھوٹے ٹکڑے ٹکڑے بھی پولیمریز کے لئے ایک نقطہ نظر کے طور پر استعمال کیے جاتے ہیں. پرائمر چھوٹے انسان ساختہ ڈی این اے (oligomers) ہیں، عام طور پر طویل عرصے سے 15 اور 30 نکلیوٹائڈز کے درمیان. وہ جین ہونے والی جمہوریت کے بہت ہی آخر میں مختصر ڈی این اے کی ترتیبوں کو جاننے یا اندازہ کرنے کے ذریعہ بنائے جاتے ہیں. پی سی آر کے دوران، ڈی این اے کی ترتیب میں گرمی اور ڈبل ڈھانچے الگ ہوتی ہے. کولنگ پر، پرائمری ٹیمپلیٹ (annealing بلایا) کے ساتھ پابند ہے اور پالیمرسی کے لئے ایک جگہ بنانا شروع کرنے کے لئے.
پی سی آر ٹیکنالوجی
پولیمیریس چین ردعمل (پی سی آر) کو ترمففیلس اور ترمفوفیکک پالیمرس انزائمز کی تلاش کی طرف سے ممکن بنایا گیا تھا (انزیمیں جو اعلی درجہ حرارت پر گرمی کے بعد ساختی سالمیت اور فعالیت کو برقرار رکھتی ہیں).
پی سی آر ٹیکنالوجی میں شامل اقدامات مندرجہ ذیل ہیں:
- ایک مرکب تیار کیا جاتا ہے، ڈی این اے کے سانچے، پولیمریج انزیم، پریمر اور ڈی این ٹی ٹی کے بہتر توجہ دی جاتی ہے. اینجیم کے بغیر مرکب کو گرم کرنے کی صلاحیت 94 ڈگری سیلسیس کی درجہ بندی میں درجہ حرارت پر ڈی این اے کے نمونے کے ڈبل ہیلی کاپٹر کی نشاندہی کی اجازت دیتا ہے.
- نردجیکرن کے بعد، نمونہ زیادہ تر اعتدال پسند حد تک 54 ڈگری تک ٹھنڈا ہوتا ہے، جس میں پرائمریوں کے ایکینلنگ (بائنڈنگ) سنگل بگاڑ ڈی این اے سانچوں کو سہولت دیتا ہے.
- سائیکل کے تیسرے مرحلے میں، نمونہ کے لۓ نمونہ 72 ڈگری، تاق ڈی این اے پولیمیریز کے لئے مثالی درجہ حرارت پر لے گیا ہے. بہاؤ کے دوران، ڈی این اے پالیمرسی ڈی این اے کے اصل واحد بھوک کا استعمال ایک پریمیم کے طور پر ہر پرائمر کے 3 'سروں تک تکمیل ڈی این ٹی پی شامل کرنے اور دلچسپی کے جین کے علاقے میں ڈبل پھنسے ہوئے ڈی این اے کا ایک حصہ پیدا کرنے کے لئے.
- پرائمریوں نے ڈی این اے کے نظریات کو انعقاد کیا ہے جو عین مطابق میچ نہیں ہیں 72 ڈگری پر اینٹینل نہیں رہتی ہیں، لہذا اس طرح کی دلچسپی کے جین کو محدود کرنا ہے.
ڈینٹرننگ، اینٹینلنگ اور لیگریشن کا یہ طریقہ ایک سے زیادہ (30-40) بار بار بار کیا جاتا ہے، اس طرح اس مرکب میں مطلوبہ جین کی کاپیاں کی تعداد بڑھتی ہوئی ہے. اگرچہ دستی طور پر یہ عمل بہت محتاط ہو جائے گا، نمونوں کو ایک پروگراممولر تھرموائکلر میں تیار کیا جاسکتا ہے، جو اب زیادہ سے زیادہ آلوکولی لیبارٹریوں میں عام ہے، اور ایک مکمل پی سی آر کے ردعمل میں 3-4 گھنٹے کی کارکردگی کا مظاہرہ کیا جا سکتا ہے.
ہر منشیات کا مرحلہ گزشتہ سائیکل کے بہاؤ کے عمل کو روکتا ہے، اس طرح ڈی این اے کی نئی بھوک لگی ہے اور اسے مطلوبہ جین کے سائز میں رکھنے کے لۓ رکھتا ہے.
کشیدگی سائیکل کی مدت طویل عرصے تک یا دلچسپی کے جین کے سائز پر منحصر ہوسکتا ہے، لیکن آخر میں، پی سی آر کے بار بار چکروں کے ذریعے، ٹیمپلیٹس کی اکثریت اکیلے دلچسپی کے جین کے سائز تک محدود ہوں گے، کیونکہ وہ دونوں پرائمروں کی مصنوعات سے پیدا ہوجائے گی.
کامیاب پی سی آر کے کئی عوامل ہیں جو نتائج کو بڑھانے کے لئے جوڑی جا سکتی ہیں. پی سی آر کی مصنوعات کی موجودگی کے لئے ٹیسٹ کرنے کے لئے سب سے زیادہ وسیع پیمانے پر استعمال شدہ طریقہ Agarose جیل الیکٹروفورسس ہے . سائز اور چارج پر مبنی ڈی این اے کے ٹکڑے الگ کرنے کے لئے کون سا استعمال کیا جاتا ہے. اس کے بعد ٹکڑے ہوئے رنگ یا ریڈیو اسوٹوز کا استعمال کرتے ہوئے بصیرت دی جاتی ہے.
ارتقاء
پی سی آر کی دریافت کے بعد سے، اصل تاق کے علاوہ ڈی این اے پولیمیرس کو دریافت کیا گیا ہے. ان میں سے کچھ اعلی درجہ حرارت پر بہتر "ثبوت دینے والی" صلاحیت یا زیادہ مستحکم ہیں، اس طرح پی سی آر کی مخصوصیت کو بہتر بنانے اور غلط DNTP کی اندراج سے غلطیوں کو کم کرنا ہے.
پی سی آر کی کچھ مختلف حالتوں کو مخصوص ایپلی کیشنز کے لئے ڈیزائن کیا گیا ہے اور اب ان میں آلوکولر جینیاتی لیبارٹریوں میں باقاعدگی سے استعمال ہوتا ہے. ان میں سے کچھ اصلی وقت پی سی آر اور ریورس ٹرانسپٹیز پی سی آر ہیں. پی سی آر کی دریافت ڈی این اے کی ترتیب، ڈی این اے فنگر پرنٹنگ اور دیگر آلوکولی تراکیب کی ترقی کی راہنمائی کرتی ہے.