تلاش کریں سپریم کورٹ پی سی آر کے نتائج کے لئے کیا ضرورت ہے

01 صاف لیبارٹری کی شرائط

چونکہ پی سی آر ڈی این اے کے ایک انوژن کا پتہ لگانے کے قابل ہے، لیبارٹری میں قدیم حالات کو برقرار رکھنے کے لئے ضروری ہے. ہمیشہ تازہ دستانے پہننے کے لئے، بیکٹری شیشے کا سامان، ٹیوبیں اور پائپیٹ تجاویز اور منحصر حل استعمال کریں، اور کام شروع کرنے سے پہلے کام کے علاقے کو صاف کریں.

ہمیشہ کے لئے کنٹرول ردعمل شامل ہیں، سانچے ڈی این اے کے بغیر اور انزیم کے بغیر یہ یقینی بنانے کے لئے کہ صحیح نتائج نمونے کے لۓ صحیح نمونے کی وجہ سے ہو.

زیادہ سے زیادہ لوگ اس بات کا یقین کرتے ہیں کہ ان کے اپنے سیٹ حلیں جو دشواری کا حل آسان بنانے کے لئے مشترکہ نہیں ہیں اور صرف پی سی آر کے لئے نامزد پائپیٹیں اکثر الگ الگ ہوتے ہیں. DNase اور RNase سے پاک پی سی آر ٹیوبیں، یروسول مزاحم پائپیٹ تجاویز اور یوبد کی روشنی کے ساتھ ایک دھندلا ہڈ میں کام کرنے کے مسائل بھی کم سے کم کرنے کے طریقے ہیں.

02 کیمیائی اجزاء

• 18 سے 24 اڈوں ہیں
• کوئی ثانوی ڈھانچہ نہیں ہے (یعنی بال بال کی چربی)
• G / C اور A / T جوڑوں کی متوازن تقسیم ہے
• 3 فٹ کے اختتام پر ایک دوسرے سے تکمیل نہیں ہیں
• پگھلنے کا درجہ حرارت (ٹی ایم) تقریبا 5-10 ڈگری سیلسیس درجہ حرارت کے نیچے درجہ حرارت ہے، جو عام طور پر 55 اور 65 ڈگری سیلسیس ہے.

دونوں پرائمریوں کے لئے TM بھی بہترین نتائج کے لئے اسی طرح ہونا چاہئے.

03 ردعمل مکس: سانچہ اور پرائمری

زیادہ سے زیادہ پریمر توجہ مرکوز 0.1 اور 0.6 مائکروومولس / ایل کے درمیان ہیں. ٹیمپلیٹ کی مقدار ڈی این اے (انسانی، بیکٹیریل، پلاسمی) کی قسم پر منحصر ہے.

ٹیمپلیٹ کی بہت کم مقدار کے ساتھ، نتائج کو بہتر بنانے کے لئے دیگر حکمت عملی موجود ہیں، جیسے سائیکل نمبروں کی تعداد یا "گرم شروع" کا استعمال. ہمیشہ نئے پرائمریوں کو مثبت کنٹرول ردعمل کے ساتھ آزمائیں، یہ یقینی بنائیں کہ وہ آپ کے مخصوص تجرباتی حالات کے تحت کام کریں.

04 ردعمل مکس: اینجیم سرگرمی

رد عمل مرکب میں MGCl2 کی حراستی پی سی آر کے نتائج پر اثر انداز کر سکتے ہیں اور زیادہ فاسد رد عمل میں اہم کردار ادا کرسکتے ہیں. میگنیشیم کیشن ڈی این ٹی پی کے ساتھ گھلنشیل پیچیدہ فارموں کو اصل ذائقہ پیدا کرنے کے لۓ پالیمریز اینجیم تسلیم کرتی ہے.

تمام چار ڈی این ٹی ٹی کے برابر مقدار پولیمیریس کی غلطی کی شرح کو کم کرنے میں بھی مدد کرتی ہے. بعض additives جیسے بیٹن، BSA، ڈٹرجنٹ، DMSO، گلیسرول، اور پیروفاسفیسس انزمی مخصوصیت یا رد عمل کی کارکردگی کو بھی متاثر کرسکتے ہیں.

05 ٹرموائکلر کی قسم

لیبارٹری کے آلات کے لئے خریداری کرتے وقت، اس بات کو ذہن میں رکھیں کہ کچھ تھرکوائکلر صحیح، مناسب درجہ حرارت کو برقرار رکھنے میں دوسروں کے مقابلے میں کم عین مطابق ہیں.

یہ ایک ایسا علاقہ ہے جہاں آپ سستے جانے والے لمبے عرصہ میں ادا نہیں کریں گے جب آپ فکری ردعمل کا سامنا کرتے ہیں یا پرائمر استعمال کرتے ہیں جو درجہ حرارت کے درجہ حرارت کی محدود حد کی ضرورت ہوتی ہے.

تھرکوائکلر کے عین مطابق برانڈ کو استعمال کرنے کے لئے تیار پتلی دیوار شدہ رد عمل ٹیوبیں جو آپ استعمال کرتے ہیں، ردعمل درجہ حرارت کو بہتر بنانے میں بھی مدد کرتے ہیں.

06 سائیکل کی ترتیبات

اضافی پیداوار ہر 20 سائیکل کے بارے میں توسیع کے وقت میں اضافہ کرکے زیادہ تر سانچے کو بڑھانے کے لۓ کم انزائم کے لئے معاوضہ کے لۓ حاصل کیا جا سکتا ہے. عام طور پر، 40 سے زائد سائیکلوں میں سے ایک کم از کم 10 ٹیمپلیٹ انوولوں کو اتنی بڑی تعداد میں ایک اتادیمیم برومائڈ-داغ زراعت جیل کو دیکھنے کے لئے بڑھانے کے لئے کافی ہے.