جینی کلوننگ ایک جین کی کاپیاں، یا کلون بنانے کا کام ہے. جب جین کی نشاندہی کی جاتی ہے، کلونوں کو حیاتیاتی اور صنعتی تحقیق کے بہت سے علاقوں میں استعمال کیا جا سکتا ہے. جینیاتی انجینئرنگ جین کلونوں کو نئے حیاتیات میں تبدیل کرنے یا پروٹین کی مصنوعات کو تبدیل کرنے کے لئے ڈی این اے کی ترتیب کو تبدیل کرنے کا عمل ہے. جینیاتی انجینئرنگ مندرجہ ذیل ضروری طریقہ کار کو انجام دینے کی صلاحیت پر منحصر ہے.
01 پولیمیرس چین ردعمل
02 پابندی انزائمز
پائیدار Endonucleases کے طور پر جانا جاتا انزائیوز کی دریافت پروٹین انجینئرنگ کے لئے ضروری ہے. یہ انزائیمس نکلیوڈائڈ ترتیب پر مبنی مخصوص مقامات پر ڈی این اے کو کاٹتے ہیں. ایک مختلف سائٹ پر ڈی این اے کاٹنے کے قابل ہونے والے سینکڑوں لاکھوں مختلف پابندیاں ، بیکٹیریا کے کئی مختلف پیٹوں سے الگ الگ ہیں. ایک پابندی کے انزیم کے ساتھ ڈی این اے کا کاٹ بہت مختلف ٹکڑے ٹکڑے، مختلف سائز کی پیداوار کرتا ہے. یہ جیل الیکٹروفورسس یا کرومیٹریگرافی کا استعمال کرتے ہوئے الگ کیا جا سکتا ہے.
03 الیکٹروفورسس
سیل کلچر سے ڈی این اے صاف کرنا، یا اسے روکنے کے انزائمز کا استعمال کرتے ہوئے اسے کاٹنے سے زیادہ استعمال نہیں ہوگا اگر ہم ڈی این اے کو نظر انداز نہیں کر سکیں گے، تو یہ دیکھنے کا طریقہ ڈھونڈنے کے لۓ آپ کو نکالنے کی کوئی چیز موجود ہے یا نہیں. اسے کاٹ دیا ہے. ایسا کرنے کا ایک طریقہ جیل الیکٹروفورسس کی طرف سے ہے. Gels مختلف مقاصد کے لئے استعمال کیا جاتا ہے، ڈی این اے کی جانچ پڑتال اور دستکوں کو تلاش کرنے کے لئے ڈی این اے کو کاٹنے سے.
04 ڈی این اے کے دو ٹکڑے شامل
جینیاتی تحقیق میں، یہ اکثر ضروری ہے کہ دو یا زیادہ انفرادی ڈھانچے کو ڈی این اے سے منسلک کرنے کے لئے، دوبارہ ریبینٹینٹ کنارے پیدا کرنے کے لئے، یا ایک سرکلر کنارے کو بند کردیں جو پابندیوں کی زنجیروں سے کاٹ دیا گیا ہے. اینزیمیمز جنہیں ڈی این اے کے لیگاس کہتے ہیں، نیوکللیڈائڈ زنجیروں کے درمیان نووونٹ بانڈ بنا سکتے ہیں. اس عمل میں اینجیمیم ڈی این پولیمریس آئی اور پولینکولوڈائڈ کینیس بھی اہم ہیں، بالترتیب اس میں 5 'اختتام'، فرقوں کو بھرنے یا فاسفوریالٹنگ کرنے کے لئے.
05 چھوٹے خود - نقل و حرکت ڈی این اے کا انتخاب
ڈی این اے کے چھوٹے سرکلر ٹکڑے ٹکڑے جو بیکٹریی جینوم کا حصہ نہیں ہیں، لیکن خود سے نقل کرنے کے قابل ہیں، پلاسمیڈ کے طور پر جانا جاتا ہے. پلازمین اکثر مائکروجنزمین کے درمیان جینوں کو منتقل کرنے کے لئے ویکٹر کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے. بایو ٹکنالوجی میں، ایک بار جب دلچسپی کے جین پر زور دیا گیا ہے اور جین اور پلاسمڈ دونوں پٹیاں انزائمز کی طرف سے کٹ جاتا ہے، وہ دوبارہ ملبوسات ڈی این اے کے طور پر جانا جاتا ہے پیدا کر رہے ہیں. وائرل (بیکٹیریافجج) ڈی این اے بھی ایک ویکٹر کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے، جیسا کہ کوسممیڈ، ریٹینبینٹ پلاسمی بیکٹیریافج جینس پر مشتمل ہے.
ایک میزبان سیل میں ایک ویکٹر کو منتقل کرنے کا طریقہ
ایک ویکٹر جیسے پلاسمی کے طور پر، نئے میزبان خلیوں میں جینیاتی مواد کو منتقل کرنے کی عمل کو تبدیلی کہا جاتا ہے. یہ تکنیک کو ضرورت ہے کہ میزبان کے خلیات ماحولیاتی تبدیلی کے سامنے سامنے آئیں، جو انہیں "وابستگی" یا عارضی طور پر ویکٹر کے مطابق ملتی ہے. Electroporation ایک ایسی ٹیکنالوجی ہے. بڑے پلاسمی، کم کارکردگی جس کے ساتھ یہ خلیات کی طرف سے لے جایا جاتا ہے. بڑی ڈی این اے کے حصوں میں بیکٹیریافج، ریروروائرس یا دیگر وائرل ویکٹر یا برہمانڈیوں کے ذریعہ ٹرانسمیشن کا استعمال کرتے ہوئے آسانی سے کلون ہوتے ہیں. فارج یا وائرل ویکٹر اکثر بازیابی کے ادویات میں استعمال ہوتے ہیں لیکن ہمارے کروموسوم کے کچھ حصوں میں ڈی این اے کی انفیکشن کا سبب بن سکتا ہے جہاں ہم یہ نہیں چاہتے ہیں، پیچیدگیوں اور یہاں تک کہ کینسر کی وجہ سے.
ٹرانجنک آرگنائیزز کو منتخب کرنے کے طریقوں 07
تمام خلیات ڈی این اے کو تبدیلی کے دوران نہیں لیتے. یہ ضروری ہے کہ ایسے لوگوں کا پتہ لگانے کا ایک طریقہ ہو جو ایسا کریں. عام طور پر، پلازمین اینٹی بائیوٹک مزاحمت کے لئے جین لے لیتے ہیں اور ٹرانجنک خلیات کو منتخب کیا جاسکتا ہے کہ ان جینوں کے اظہار اور ان پر اینٹی بائیوٹک پر مشتمل میڈیا پر ان کی ترقی کی بنیاد پر. انتخاب کے متبادل طریقوں کو دیگر رپورٹر پروٹین جیسے ایکس-گل / LACZ نظام، یا سبز فلوروسنسی پروٹین کی موجودگی پر منحصر ہے، جس کا انتخاب رنگ اور فلوروسیسی پر مبنی ہے.